鸡3种主要DNA病毒多重感染复合PCR检测方法的建立

作者: 李学伍 [1] 刘媛 [2] 王丽 [1] 邓瑞广 [1] 赵东 [1] 杨继飞 [1] 柴书军 [1]

关键词: 马立克氏病病毒传染性喉气管炎病毒鸡痘病毒 DNA病毒复合PCR

摘要：依据GenBank中注册的鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡痘病毒(FPV)基因组核苷酸序列中的保守序列设计引物,3种病毒各设计3对引物,共计9对引物,经生物学软件筛选后,得到3对相互匹配较佳的引物.3对匹配引物经单一PCR验证后,优化复合PCR反应条件,确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶浓度;经特异性、敏感性试验及简化PCR试验,建立简易复合PCR检测方法.复合PCR扩增出的3条带大小与预期一致,即228 bp(MDV)、400 bp (ILTV)、499 bp (FPV);建立的复合PCR方法能同时检测出100 fg MDV、ILTV、FPV的DNA.同时依据PCR技术原理,将经典的三温热循环改进为二温热循环试验,即将退火和延伸合并为一步(62℃),缩短了反应时间.建立的3种病毒的复合PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于临床病料的快速诊断.

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鸡3种主要DNA病毒多重感染复合PCR检测方法的建立

作者: 李学伍 [1] 刘媛 [2] 王丽 [1] 邓瑞广 [1] 赵东 [1] 杨继飞 [1] 柴书军 [1]

关键词: 马立克氏病病毒 传染性喉气管炎病毒 鸡痘病毒 DNA病毒 复合PCR

关键词: 马立克氏病病毒传染性喉气管炎病毒鸡痘病毒 DNA病毒复合PCR