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表达猪Viperin蛋白重组腺病毒的构建及其对PRRSV复制的抑制作用
作者: 方剑玉 [1] 朱文豪 [2] 郭小参 [3] 白献晓 [2] 李海利 [2] 徐引弟 [2] 郎利敏 [2] 王治方
关键词: 猪Viperin蛋白 重组腺病毒 抗病毒活性 猪繁殖与呼吸综合征病毒
摘要:为研究猪Viperin蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的抑制作用,通过RT-PCR方法扩增猪Viperin基因,并克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经菌液PCR、酶切鉴定后进行测序.将Pme Ⅰ内切酶线性化的重组穿梭载体质粒(pAdTrack-sVIP)电转化大肠杆菌BJ5183,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1进行同源重组,提取重组后的腺病毒质粒,经内切酶PacⅠ线性化后转染HEK-293A细胞,装配成完整的病毒粒子rAd-sVIP.重组腺病毒rAd-sVIP感染细胞后,可见绿色荧光蛋白的表达.RT-PCR、Western blot检测结果表明,重组腺病毒rAd-sVIP可正确表达猪Viperin蛋白,且表达的猪Viperin蛋白具有良好的反应原性,对PRRSV的复制具有明显的抑制作用.
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