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猪Gasp1和Gasp2基因对C2C12细胞分化的影响
作者: 樊爽爽 张雪梅 刘晓贺 刘姣扬 明胜利 褚贝贝 杨国宇 王江
关键词: 猪Gasp1和Gasp2 基因克隆 真核表达 C2C12细胞分化
摘要：为研究猪Gasp1、Gasp2对成肌细胞分化的影响,采用RT-PCR技术从猪肌肉组织中扩增Gasp1和Gasp2基因片段,将其克隆入 phiC31载体,构建重组质粒 phiC31 -Gasp1和 phiC31 -Gasp2.将重组质粒转染至C2C12小鼠成肌细胞,经嘌呤霉素筛选在荧光显微镜下观察,获得稳定表达Gasp1和Gasp2基因的细胞系后,应用CCK-8法检测细胞增殖能力.分别在细胞分化1、2、3、4、5 d时收集细胞,采用实时荧光定量PCR检测MyoD、MyoG、P21及MHC肌细胞分化相关基因的表达变化,进而分析Gasp1和Gasp2基因对肌肉分化的影响.结果显示,成功克隆了猪Gasp1和Gasp2基因,构建了phiC31- Gasp1和phiC31-Gasp2重组质粒,荧光显微镜下可见phiC31载体和Gasp1、Gasp2基因共转染的C2C12细胞表达强烈的绿色荧光,经CCK-8检测发现,过表达Gasp1、Gasp2基因对细胞的生长增殖影响为初期促进、后期抑制;实时荧光定量PCR检测结果表明,猪Gasp1和Gasp2可以促进细胞分化因子MyoD、MyoG、P21、MHC基因的表达.以上结果表明,Gasp1、Gasp2基因可以促进肌肉分化.
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