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创伤弧菌FrsA蛋白的纯化及生化表征
作者: 鲍玲玲 [1] 李至敏 [2] 王小琴 [1] 汤亚兰 [1] 许文武 [1] 李志敏 [1]
关键词: 创伤弧菌 FrsA蛋白 蛋白质纯化 生化表征 酯酶
摘要：为确定创伤弧菌FrsA蛋白(VvFrsA)在大肠杆菌中的表达条件及体外纯化步骤,并对其进行生化表征分析.通过分子生物学手段将合成的创伤弧菌的FrsA基因(VvFrsA)连接到pET28a载体上,构建pET28a-VvFrsA原核表达载体.将该载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导实现了VvFrsA蛋白的可溶性表达.采用Ni-NTA亲和层析法纯化,得到重组VvFrsA蛋白.酶催化活性研究结果显示,VvFrsA具有酯酶功能,可以催化对硝基苯酚脂肪酸酯的水解,并且其最适底物为对硝基苯酚短链脂肪酸酯.综上,利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株成功表达了可溶性VvFrsA蛋白,并且VvFrsA体外具有催化对硝基苯酚脂肪酸酯水解活性.
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