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新发猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达和纯化
作者: 连凯琪 周玲玲 张明亮 王英杰 张慢 宋玉伟
关键词: 猪圆环病毒3型 包涵体 原核表达 蛋白质纯化
摘要:为制备新发猪圆环病毒3型(PCV-3)衣壳蛋白(Cap)的抗原,在大肠杆菌中表达Cap蛋白,并对其进行纯化.通过PCR扩增去除核定位信号区的Cap136-645基因,构建重组表达质粒pET30a(+)-Cap136-645,转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析进行鉴定,并纯化Cap136-645蛋白.结果表明,成功构建了pET30a(+)-Cap136-645重组表达质粒,且可在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中可大量表达,表达的重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子质量约为27.5 ku,纯化的蛋白质质量浓度高达1.28 μg/μL,且条带单一.
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