猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒表达系统中的分泌表达及活性检测

作者:魏蔷白怡霖柴书军刘运超宋亚鹏张改平

关键词: 猪瘟病毒; Erns蛋白; 分泌表达; 糖基化分析; 活性; 杆状病毒;

摘要：为制备用于ELISA检测猪瘟病毒的Erns蛋白,根据昆虫细胞密码子偏好性对Erns的基因序列进行优化,将优化后的Erns基因插入带有信号肽的表达载体pFastBacl-gp67中;随后将重组质粒pFastBacl-gp67-Erns转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,挑选白斑,提取重组黏粒Bacmid-Erns;将重组黏粒转染sf21细胞得到杆状病毒,经扩增后得到P3病毒,利用其大量感染细胞,3 d后收取细胞培养上清;通过镍填料纯化得到分泌表达的Erns蛋白,通过SDS-PAGE及Western blot检测分泌蛋白的表达水平、纯化情况,用PNGase F处理分析其糖基化水平,通过ELISA分析其抗原性。结果显示,成功构建了重组质粒pFastBacl-gp67-Erns,蓝白斑筛选获得了重组黏粒Bacmid-Erns,在此基础上获得了重组杆状病毒,利用其感染sf21细胞,成功分泌表达了Erns蛋白,纯化所得Erns蛋白纯度较高,具有较高糖基化修饰水平,且纯化所得Erns蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清,其抗原性良好。

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猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒表达系统中的分泌表达及活性检测

作者:魏蔷 白怡霖 柴书军 刘运超 宋亚鹏 张改平

关键词: 猪瘟病毒; Erns蛋白; 分泌表达; 糖基化分析; 活性; 杆状病毒;

作者:魏蔷白怡霖柴书军刘运超宋亚鹏张改平