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小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活检测
作者: 曹玲珑 ; 李冬兵 ; 熊大斌 ; 邓利 ; 牛洪斌 ; 姜玉梅 ; 尹钧
关键词: 小麦 硫氧还蛋白 酵母双杂 诱饵载体 自激活
摘要：为构建小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体,并检测其对酵母细胞的自激活作用。利用RT-PCR扩增TaTrx-h基因的ORF区域,并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用。结果表明,含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长,说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长,说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用。因此,可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trxh蛋白相互作用的蛋白。