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5 Aza dC对奶牛乳腺上皮细胞PPARγ表达的影响
作者: 边艳杰 ; 王杰 ; 王春梅 ; 李庆章
关键词: 5 氮杂 2′-脱氧胞苷 奶牛乳腺上皮细胞 PPARγ基因 DNA甲基化
摘要：为阐明DNA甲基化对奶牛乳腺泌乳功能调控的机制，研究了甲基化抑制剂5氮杂2′脱氧胞苷（5 Aza dC）对奶牛乳腺上皮细胞中PPARγ基因启动子甲基化状态及其表达的影响，以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型，采用0.1、0.5、1.0、5.0μmol／L的5 Aza dC对奶牛乳腺上皮细胞进行处理，用EpiQuikTM DNA methyltransferase assay试剂盒进行甲基转移酶活性检测，采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力，利用亚硫酸氢盐测序（BSP ）技术检测了PPARγ启动子的甲基化特征，qRT PCR法检测PPARγmRNA表达的变化，Western blot检测PPARγ蛋白表达的变化。结果显示：与空白对照组相比，0.1μmol／L的5 Aza dC对奶牛乳腺细胞生长无毒性，处理96 h甲基转移酶活性极显著降低，奶牛乳腺细胞的PPARγ基因启动子甲基化程度降低，PPARγ表达升高。表明5 Aza dC可降低奶牛乳腺细胞中PPARγ启动子区域的甲基化程度，促进PPARγ表达。