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利用烟草的cDNA酵母表达文库筛选镉胁迫相关基因
作者: 李静 [1,2] ; 王晶 [1,2] ; 张美 [1]
关键词: 烟草 重金属 镉胁迫 cDNA文库 功能基因
摘要：为了鉴定烟草在重金属镉胁迫处理下的功能基因，构建烟草cDNA酵母表达文库，并利用镉敏感的突变株对文库进行初步筛选。首先将烟草幼苗进行重金属胁迫处理，然后取幼根提取总RNA并纯化mRNA，采用SMART技术反转录成双链cDNA，将cDNA与入门载体pDONR222的同源重组区连接，再转到酵母表达载体pDEST22上，构建了Gateway技术兼容的酵母cDNA表达文库。经检测，构建的cDNA酵母表达文库滴度为4．32×10^6cfu／mL，库容量为0．86×10^7cfu，平均插入片段长度大于1kb，文库质量较高。通过镉敏感酵母突变株△ycf1筛选烟草重金属镉胁迫相关基因，获得酵母单克隆70个。经分析可知，其涉及到谷胱甘肽转移酶、铜分子伴侣及甲硫蛋白等24个不同蛋白基因，初步鉴定为烟草应答重金属镉胁迫的候选基因。