土壤微生物总DNA的V_3可变区PCR反应体系优化

作者: 殷全玉 [1,2] ; 郭夏丽 [1] ; 赵铭钦 [2] ; 王岩 [1]

关键词: 土壤微生物DNA 16SrDNA V3区 PCR扩增优化热启动方式退火温度

摘要：为了优化以土壤微生物DNA为模板的PCR反应条件,采用E.Z.N.A.soil DNA kit试剂盒提取土壤微生物总DNA,对16SrDNA V3可变区的PCR反应体系和反应条件进行优化。主要从DNA模板用量、引物浓度、退火温度、热启动方式4个方面进行筛选试验,最后得出最适宜的土壤DNA扩增体系为：10.5ng模板DNA、5μL 10×buffer、4μL 2.5mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5μL,2.5UTaq酶,加无菌ddH2O补足至50μL;PCR循环程序为：94℃预变性5min;94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸70s,29个循环;72℃延伸5min。试验结果表明：选择热启动方式和合适的退火温度是获得高质量PCR产物的关键。

上一篇：融雪时间对土壤有机碳含量的影响
下一篇：豫中烟区烤烟氯积累规律及土壤氯素平衡研究

土壤微生物总DNA的V_3可变区PCR反应体系优化

作者: 殷全玉 [1,2] ; 郭夏丽 [1] ; 赵铭钦 [2] ; 王岩 [1]

关键词: 土壤微生物DNA 16SrDNA V3区 PCR扩增 优化 热启动方式 退火温度

关键词: 土壤微生物DNA 16SrDNA V3区 PCR扩增优化热启动方式退火温度