一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata）的巢式 PCR 方法

摘要：为建立检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata ）的方法，从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势 A．alternata 病原菌株，对其 rDNA 的内部转录间隔区序列（ITS）进行测序，序列比较表明，分离到的病原菌株与 GenBank 公布的 A．alternata 的 ITS 区序列一致性达到99％～100％。根据 Alternaria 属菌株（A．alternata、A．tenuis、A．tenuissima）和麦类根腐离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana ）的 ITS 序列比对结果，设计出1对 A．alternata 特异性引物 Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证，只有在 A．alternata 中能特异性地扩增出1条443 bp 的 DNA 片段。以真菌通用引物 ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R 为内侧引物进行巢式 PCR 扩增，能检测到 A．alternata DNA 的最低质量浓度为50 pg/μL。因此，建立的巢式 PCR 方法能够快速、特异地检测小麦中的 A．alternata。